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        氣相色譜儀-液相色譜儀-環氧乙烷檢測色譜儀廠家-南京科捷分析儀器有限公司

        豬血中免疫球蛋白IgG的高效液相HPLC檢測方案

        【免疫球蛋白】

        免疫球蛋白:指具有抗體活性的動物蛋白。主要存在于血漿中,可溶性免疫球蛋白存在于體液中,參與體液免疫 ,也見于其他組織和一些分泌液中。人血漿內的免疫球蛋白大多數存在于丙種球蛋白(γ-球蛋白)中。免疫球蛋白可以分為IgG、IgA、IgM、IgD、IgE五類。?

        IgG生理作用】

        人體血清免疫球蛋白IgG是初級免疫應答中最持久、最重要的抗體,它僅以單體形式存在。大多是抗菌性、抗毒性和抗病毒抗體屬于IgG,它在抗感染中起到主力軍作用,它能夠促進單核巨噬細胞的吞噬作用(調理作用),中和細菌毒素的毒性(中和毒素)和病毒抗原結合使病毒失去感染宿主細胞的能力(中和病毒)。IgG 在機體合成的年齡要晚于IgM,在出生后第3 個月開始合成,3-5 歲接近成年人水平。它是唯一能通過胎盤的Ig,在自然被動免疫中起重要作用。此外,IgG 還具有調理吞噬和結合SPA等作用。

        1、儀器與試劑

        ? 1.1儀器、設備

        ??LC-600高效液相色譜儀(南京科捷)

        ? 蛋白柱

        ? 分析天平

        ? PH計

        ? 容量瓶

        ? 針頭過濾器

        ? 微孔濾膜:0.45μm

        ? 1.2試劑

        ? 磷酸二氫鉀(AR)

        ? 磷酸氫二鉀(AR)

        2、供試品溶液和對照品溶液的制備

        對照品溶液的制備 ? 取IgG標準品0..01g,用流動相A溶解并定容至10.0ml,搖勻,即得標準儲備液,濃度為1mg/ml;取適量該儲備液用流動相A稀釋成含IgG0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/ml的標準系列,臨用時配制。

        供試品溶液的制備 ?稱取一定量的血漿蛋白粉試樣約0.1g于容量瓶中,用流動相A稀釋至25.0ml,搖勻,經0.45um微孔濾膜過濾后進樣分析。

        3、色譜條件

        ? 色譜柱:蛋白柱

        ? 流動相:流動相A:PH6.5,0.05mol/l磷酸鹽緩沖液

        ? 流動相B:PH2.5,0.05mol/l甘氨酸鹽緩沖液

        ? 梯度洗脫程序見下表

        ? 波長:280nm

        ? 流速:0.4mL/min

        ? 進樣量:20ul

        ? 溫度:室溫

        梯度洗脫程序

        ?

        4、測定法

        ? 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20ul,注入液相色譜儀,測定,即得

        5、譜圖

        ?

        ?

        ?

        ?

        【儀器配置】

        型號名稱

        配置

        數量

        ?

        ?

        液相色譜儀LC-600A

        (智能全控)

        ?

        UV600紫外檢測器

        ??1臺

        P600恒流泵(0.001~9.999ml/min?

        2臺

        美國原裝進口7725i進樣閥(含支架)

        1只

        100ul進樣針

        1只

        梯度混合器

        1只

        工具包(含管路托盤)

        1只

        液相色譜柱

        250×4 .6,5um ??C18進口

        1

        分析天平

        200g.1mg

        1

        酸度計

        ?

        1

        JL-120DTH超聲波清洗器

        加熱 ???3L

        1

        KJ330色譜柱溫箱

        恒溫誤差±0.1

        1

        溶劑過濾器

        含真空泵

        1

        濾膜

        有機、水系過濾膜 ?2

        有機、水系過濾器 ?2盒 ???

        1

        流動相儲液瓶

        ?

        2

        電腦、打印機

        ?

        1

        ?

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