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        氣相色譜儀-液相色譜儀-環氧乙烷檢測色譜儀廠家-南京科捷分析儀器有限公司

        玉米赤霉烯酮的高效液相色譜HPLC檢測方案

        【玉米赤霉烯酮】

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        玉米赤霉烯酮是一種酚的二羥基苯酸的內酯結構,分子式為C18H22O50它不溶于水、二硫化碳和四氧化碳,溶于堿性水溶液、乙醚、苯、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯和酸類,微溶于石油醚。由于玉米赤霉烯酮是一種內酯的結構,因此在堿性環境的條件下可以將酯鍵打開,當堿的濃度下降時可將鍵恢復。玉米赤霉烯酮又稱F-2毒素,玉米烯酮。它首先從有赤霉病的玉米中分離得到。玉米赤霉烯酮主要污染玉米、小麥、大米、大麥、小米和燕麥等谷物,其中玉米的陽性檢出率為45%,最高含毒量可達到2909mg/kg;小麥的檢出率為20%,含毒量為0.364~11.05mg/kg。玉米赤霉烯酮的耐熱性較強,110℃下處理1h才被完全破壞。?

        【作用】

        玉米赤霉烯酮主要由禾谷鐮刀菌產生,粉紅鐮刀菌、竄珠鐮刀菌、三線鐮刀菌等多種鐮刀菌也能產生這種毒素。許多農作物如小麥、大豆等植物中也存在玉米赤霉烯酮。玉米赤霉烯酮有許多種衍生物,例如7一脫氫玉米赤霉烯酮、玉米赤霉烯酸、8一羥基玉米赤霉烯酮。同時,植物中的玉米赤霉烯酮結構和對生物體的影響與霉菌產生的玉米赤霉烯酮作用是一致的,這也為我們預防玉米赤霉烯酮中毒提供了一條途徑。玉米赤霉烯酮是一種特殊毒性的生物毒素,具有類雌激素樣作用,能引起動物流產、死胎、返情等生殖機能異常,還可以導致生長下降、免疫抑制、不育、畸形等。國內外學者做了大量的研究,來揭示玉米赤霉烯酮損害機體的機制。它主要通過影響機體的生殖性能,引起細胞凋亡、致畸、損傷DNA、氧化損害、影響免疫機能等機制,來影響動物與人類的健康。??

        【樣品處理過程】

        標準儲備液(0.1mg/ml):準確稱取一定量標準品,用甲醇+乙腈(1+1)溶解,配成0.1mg/ml的標準液。標準工作液:根據使用需要準確吸取一定量的玉米赤霉烯酮儲備液,用流動相稀釋,分別配成相當于10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml、500ng/ml的標準工作液。用0.45μm的有機系濾膜過濾,精密量取20μL,注入液相色譜儀,記錄色譜圖。

        樣品處理:將樣品研磨,硬質的糧食用高速萬能粉碎機磨細并通過試驗篩,不要磨成粉末,稱取50g(精確到0.01g)磨碎的試樣與100mL容量瓶中,加入5gNaCl,用提取液(乙腈+水(9+1))定容至刻度,混勻,轉移至均質杯中高速攪拌提取2min,定量濾紙過濾,移取10mL濾液于50mL容量瓶中加水定容至刻度,混勻,用玻璃纖維濾紙過濾至濾液澄清,收集濾液于干凈的容器中。
        ????? ?凈化、洗脫:將免疫親和柱連接于玻璃注射器下,準確移取濾液10mL注入玻璃注射器中,將空氣壓力泵與玻璃注射器相連接,調節壓力,使溶液以約1滴/s的流速通過,直至空氣進入親和柱中,依次用10mLPBS清洗緩沖液和10mL水淋洗免疫親和柱,流速約為1滴/s-2滴/s直至空氣進入親和柱中,棄去全部流出液抽干小柱,加入1mL甲醇洗脫,再用甲醇定容至1mL。

        【色譜條件】
        ????? 色譜柱: C18反相色譜柱, 4.6 mm*250 mm,粒度5 μm
        ????? 流動相:甲醇:水:乙腈=8:46:46
        ????? 波長:λex274nm?? λem440nm
        ????? 流速:1.0mL/min
        ????? 進樣量:20μL
        ????? 柱溫:30℃??

        【譜圖】

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        【儀器配置】

        型號名稱

        配置

        數量

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        ?

        液相色譜儀LC-600A

        (智能全控)

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        熒光檢測器

        ??1臺

        P600恒流泵(0.001~9.999ml/min?

        1臺

        美國原裝進口7725i進樣閥(含支架)

        1只

        100ul進樣針

        1只

        工具包(含管路托盤)

        1只

        液相色譜柱

        250×4 .6,5um ??C18進口

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        分析天平

        200g.1mg

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        旋轉蒸發儀

        ?

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        JL-120DTH超聲波清洗器

        加熱 ???3L

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        KJ330色譜柱溫箱

        恒溫誤差±0.1

        1

        溶劑過濾器

        含真空泵

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        濾膜

        有機、水系過濾膜 ?2

        有機、水系過濾器 ?2盒 ???

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