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        氣相色譜儀-液相色譜儀-環氧乙烷檢測色譜儀廠家-南京科捷分析儀器有限公司

        魚粉中氨基酸的高效液相色譜(hplc)檢測方案

        隨著我國飼料工業的發展,魚粉的需要量逐年增加,魚粉的質量問題越來越引起飼料行業、養殖業的重視。魚粉是水產飼料的主要蛋白源,尤其含有動物生長所必需的氨基酸,由于魚粉用量大,價格高,有些廠家摻雜使假、以次充好,使魚粉質量參差不齊,這一行為業給魚粉品質分析帶來了一定困難。因此,有必要建立一個有效的手段對魚粉中氨基酸進行定量分析。

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        魚粉圖片

        1、儀器與試劑

        ? ??LC-600高效液相色譜儀(南京科捷)

        ? ? 色譜柱:C18 ?250mm×4.6mm×5μm

        ? ? 分析天平

        ? ? 恒溫箱,溫度控制在110±1℃

        ? ? 微量進樣器,(20μL)一支

        ? ? 漩渦混勻器

        ? ? 氮吹儀

        ? ? 針頭過濾器

        ? ? 微孔濾膜:0.45μm

        ? ? 1.2試劑

        ? ? 鹽酸溶液,6mol/L:將優級純鹽酸與水按1:1(V/V)混合。

        ? ? 氨基酸標準工作溶液。

        ? ? 乙腈,色譜純。

        ? ? 三水合醋酸鈉,優級純。

        ? ? 冰醋酸。

        ? ? 正己烷,色譜純。

        2、供試品溶液和對照品溶液的制備

        對照品溶液的制備 ? 取氨基酸混合工作標液500ul,用水稀釋至5ml,即得。

        供試品溶液的制備 ? 稱取試樣50-100mg(準確至0.1mg)于據塞試管中,加入6.0mol/l鹽酸10ml,混勻,充分提取10min,蓋緊蓋子。將樣品置于110℃恒溫干燥箱中,水解22-24h。冷卻后充分混勻,過濾。根據實驗要求移取適量上清液,60℃下氮氣吹干,備用。以下按照衍生方法包進行。

        方法包衍生方法:將恒溫水浴鍋預熱至50±1℃,分別將A、B兩種衍生試劑用稀釋至原來濃度的1/5倍。精密量取上述對照品1ml,至于試管中,加入稀釋后的A溶液0.5ml和稀釋后的B溶液0.5ml,搖勻;在50±1℃的水浴中加熱45分鐘,取出,加入正己烷溶液1ml,振搖;并用孔徑為0.45μm有機膜過濾,放置30min后,取澄清的下層液進行分析實驗。供試品的衍生步驟與對照品相同。

        3、色譜條件

        ? ?色譜柱:AA ?4. 6 mmx250 mm,粒度5 μm

        ? ??流動相:

        ? ? 流動相A:0.1mol/L醋酸鈉溶液(pH6.5):乙腈=93:7

        ? ? 配置方法:準確稱取三水合醋酸鈉13.6g于1000ml水中,攪拌均勻,溶解,用冰醋酸或氫氧化鈉溶液調節pH值至6.5; 準確量取配制好的三水合醋酸鈉溶液465ml和乙腈35ml,混合均與,抽濾,過0.45μm濾膜。

        ? ? 流動相B:水:乙腈=20:80。

        ??? 配制方法:準確量取水100ml和乙腈400ml,混合均勻,抽濾,過0.45μm濾膜。

        ? ? 波長:254nm

        ? ? 流速:1. 0 mL/min

        ? ?梯度設置:

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        4、測定法

        分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20ul,注入液相色譜儀,測定,即得

        5、譜圖 ?

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        儀器配置:

        型號名稱

        配置

        數量

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        液相色譜儀LC-600

        (智能全控)

        P600寶石恒流泵(0.001~9.999ml/min???

        UV600紫外檢測器(190~700nm

        Rehodyne7725I手動進樣閥

        20uL定量環(美國)

        梯度混合器

        工具包

        2臺

        1臺

        1只

        1只

        1只

        1套

        液相色譜柱

        250×4 .6,5um ??C18進口

        1

        色譜工作站(可反控主機)

        電腦、打印機自配

        1

        JL-120DTH超聲波清洗器

        3L

        1

        KJ330色譜柱溫箱

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        1

        溶劑過濾器(真空泵)

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        濾膜、濾器

        有機、水系0.45

        1

        25ul進樣器

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        1

        電腦、打印機

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        1

        旋渦混合器

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        1

        ?

        氮吹儀

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        標準物質

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